Transfeksi adalah proses yang terlibat dalam pemindahan gen sel eukariotik menggunakan kaedah kimia atau fizikal. Transfeksi dapat diklasifikasikan ke dalam dua jenis utama yang dinamakan transfection sementara dan transfection yang stabil. Semasa pemindahan sementara, gen kepentingan gagal diintegrasikan dengan genom tuan rumah dan dinyatakan secara sementara dalam tuan rumah untuk jangka pendek sedangkan, dalam transfection yang stabil, gen kepentingan mengintegrasikan dengan genom tuan rumah dan dikekalkan untuk jangka panjang dalam beberapa generasis. Ini adalah perbezaan utama antara transfection sementara dan stabil. Dalam kedua -dua kes, transfection berjaya, dan gen dinyatakan.
Kandungan
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apakah transfection sementara
3. Apakah transfection yang stabil
4. Perbandingan sampingan - transfection vs stabil sementara
5. Ringkasan
Transfeksi adalah alat penting untuk memasukkan gen ke dalam sel eukariotik. Antara kedua -dua jenis transfection, transfection sementara adalah cara biasa dalam pemindahan gen. Melalui vektor, gen asing berubah di dalam sel tuan rumah. Setelah DNA asing memasuki sel tuan rumah, ia mempunyai dua pilihan. Ia boleh diintegrasikan dengan genom tuan rumah dan meniru, atau tinggal di dalam tanpa mengintegrasikan ke dalam genom. Transfeksi sementara mempamerkan ekspresi sementara gen yang dimasukkan tanpa mengintegrasikan ke dalam genom tuan rumah. Gen menyatakan dan menghasilkan protein berkod sehingga sel membahagikan. Walau bagaimanapun, disebabkan ketidakupayaan integrasi, ia tidak dapat meniru dan memasuki generasi akan datang. Pemindahan jenis ini berjaya untuk jangka masa yang singkat. Semasa pembahagian sel atau disebabkan oleh beberapa faktor lain, DNA asing tertakluk kepada kemerosotan. Transfeksi sementara ditunjukkan apabila DNA asing berada dalam bentuk DNA yang sangat bergelung.
Rajah 01: Transfeksi sementara
Transfeksi yang stabil menunjukkan integrasi gen asing yang berjaya menjadi genom tuan rumah. Setelah DNA asing masuk ke dalam sel tuan rumah, sebahagian daripada DNA asing disatukan dengan genom tuan rumah dan menjadi sebahagian daripadanya. Oleh itu, DNA asing juga mereplikasi dan masuk ke generasi akan datang apabila genom tuan rumah mereplikasi. Pemindahan jenis ini rumit dan jarang berlaku. Walau bagaimanapun, disebabkan oleh transfeksi yang stabil ke dalam genom, sifat ini dikekalkan untuk tempoh yang lebih lama beberapa generasi.
Transfeksi yang stabil adalah proses yang sukar dan memerlukan penyampaian DNA DNA asing dan sel yang berkesan ke dalam genomnya. Oleh itu, DNA linear nikmat transfeksi yang stabil daripada DNA bulat. Walau bagaimanapun, kadar pemindahan yang stabil adalah kira -kira satu dalam 104 sel yang berubah. Transfeksi yang stabil dapat dilihat oleh penanda penanda yang boleh dipilih dan melakukan pemilihan buatan pada medium.
Rajah 02: Transfeksi yang stabil
Transfection stabil vs stabil | |
DNA asing tidak disatukan ke dalam genom tuan rumah. | DNA asing disatukan dengan genom tuan rumah dan menjadi sebahagian daripadanya. |
Replikasi di dalam tuan rumah | |
Gen yang ditransfeksi tidak meniru di dalam tuan rumah. Oleh itu gen tidak diserahkan kepada generasi akan datang. | Gen ditiru dalam tuan rumah dan diserahkan kepada generasi akan datang. |
Tempoh masa ekspresi gen | |
Gen dinyatakan untuk tempoh masa yang terhingga dan selepas itu, mereka dimusnahkan. | Gen menjadi sebahagian daripada genom dan dinyatakan dalam generasi untuk jangka masa yang panjang. |
Gunakan | |
Ini berguna untuk mengkaji kesan ekspresi jangka pendek gen atau produk gen. | Ini berguna untuk mengkaji kesan ekspresi gen jangka panjang. |
Pengesanan pemindahan | |
Gen dinyatakan dan dapat dengan mudah dikesan dengan memasukkan gen wartawan. | Transfeksi yang stabil dapat dikesan dengan mudah dengan memasukkan penanda yang boleh dipilih dan memilih melalui pemilihan buatan di media. |
Kejadian dan proses | |
Transfeksi sementara adalah perkara biasa dan tidak kompleks untuk dilakukan. | Transfeksi yang stabil jarang berlaku dalam kejadian dan kompleks untuk dilakukan. |
Sifat DNA | |
DNA yang sangat supercoiled sesuai untuk transfection sementara. | DNA linear sesuai untuk transfection yang stabil. |
Aplikasi | |
Ini digunakan untuk kajian gen knockdown atau membungkam dengan RNA yang menghalang, pengeluaran protein pada skala kecil | Ini digunakan untuk pengeluaran protein pada kajian farmakologi jangka panjang, jangka panjang, terapi gen, penyelidikan mengenai mekanisme peraturan genetik jangka panjang |
Transfeksi sementara dan stabil adalah dua jenis pemindahan yang ditunjukkan semasa gen yang memindahkan ke sel eukariotik oleh sistem bukan virus. DNA asing yang berubah tidak diintegrasikan dengan genom tuan rumah dalam pemindahan sementara semasa ia diintegrasikan dengan genom tuan rumah dalam pemindahan yang stabil. DNA bergelung bulat ditunjukkan transfection sementara manakala DNA linear lebih suka transfection yang stabil. Ini adalah perbezaan antara transfection sementara dan stabil. Walau bagaimanapun, transfection sementara lebih biasa dan mudah berbanding dengan pemindahan yang stabil. Tetapi pemilihan satu antara dua bergantung pada tujuan pemindahan gen dan tempoh projek penyelidikan.
Rujukan:
1. Condreay, j. Patrick, Sam M. Witherspoon, William C. Tanah liat, dan Thomas a. Kost. "Ekspresi gen sementara dan stabil dalam sel -sel mamalia yang ditransduksi dengan vektor baculovirus rekombinan."Prosiding Akademi Sains Negara Amerika Syarikat. Akademi Sains Kebangsaan, 05 Jan. 1999. Web. 25 Mac. 2017
2. Kim, Tae Kyung, dan James H. Eberwine. "Transfeksi sel mamalia: masa kini dan masa depan."Kimia analitik dan bioanalitik. Springer-Verlag, Ogos. 2010. Web. 25 Mac. 2017