Perbezaan antara pengekstrakan DNA dan RNA

Perbezaan utama - Pengekstrakan DNA vs RNA
 

Kajian DNA dan RNA adalah aspek penting untuk memahami konsep asas biologi molekul, bioteknologi, dan genetik. Pengekstrakan sampel DNA dan RNA tulen diperlukan untuk menjalankan prosedur eksperimen semasa kajian ini. Perbezaan utama antara pengekstrakan DNA dan RNA ialah Proses pengekstrakan DNA membersihkan DNA manakala pengekstrakan RNA membersihkan RNA. Proses pengekstrakan DNA mempunyai tiga langkah yang berbeza: lisis sel dan katabolisme lipid membran dan protein, gumpalan katabolit dengan larutan garam pekat dan pemendakan DNA dengan etanol. Prosedur tiga langkah mungkin terdiri daripada dua langkah pilihan. Proses pemurnian RNA terdiri daripada empat langkah yang berbeza: penambahan guanidium thiocyanate untuk lisis sel, denaturasi protein termasuk ribonukleases, pemisahan RNA dengan penambahan kloroform dan fenol dan mencuci endapan menggunakan etanol.

Kandungan

1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apakah pengekstrakan DNA
3. Apakah pengekstrakan RNA
4. Persamaan antara pengekstrakan DNA dan RNA
5. Perbandingan sampingan - DNA vs pengekstrakan RNA dalam bentuk jadual
6. Ringkasan

Apakah pengekstrakan DNA?

Pengekstrakan DNA adalah proses fizikal dan kimia yang digunakan untuk membersihkan DNA dari sampel. Pengekstrakan DNA adalah aspek penting dalam konteks biologi molekul dan sains forensik. Prosesnya adalah tiga langkah asas. Pada mulanya, sel -sel yang menarik harus diperolehi. Seterusnya, lisis sel difasilitasi untuk memecahkan membran sel, yang membuka sel dan mendedahkan sitoplasma bersama dengan DNA. Surfaktan atau detergen lain boleh digunakan untuk melipat lipid dari membran sel manakala protein yang hadir dibubarkan oleh protease. Ini adalah langkah pilihan. Sebaik sahaja sel dilepaskan, gumpalan molekul katabolasi difasilitasi oleh penyelesaian garam pekat. Ia diikuti dengan sentrifugasi penyelesaian yang memisahkan rumpun serpihan dari DNA. Pada peringkat ini, DNA yang dibezakan dicampur dengan reagen dan garam yang digunakan semasa kitaran sel.

Rajah 01: Pengekstrakan DNA

Untuk membersihkannya lebih jauh, langkah -langkah berikut boleh digunakan. Satu kaedah ialah pemendakan etanol, yang melibatkan pencampuran etanol sejuk ais dengan sampel DNA yang dipisahkan. DNA tidak larut dalam alkohol dan dengan itu menghasilkan pelet kerana pengagregatan molekul DNA bersama.  Natrium asetat ditambah dalam proses ini untuk meningkatkan tahap pemendakan dengan meningkatkan kekuatan ionik. Sebagai tambahan kepada proses pemendakan etanol, proses pengekstrakan fenol-kloroform juga boleh diinduksi untuk ini. Dalam kaedah ini, fenol denatures protein yang terdapat dalam sampel. Setelah disentrifugasi, protein denatured akan kekal dalam fasa organik manakala molekul DNA yang dicampur dengan kloroform akan hadir dalam fasa berair. Kloroform akan mengeluarkan sisa fenol. Setelah pengekstrakan selesai, DNA disimpan dibubarkan dalam penampan TE atau air ultra tulen.

Apakah pengekstrakan RNA?

Penyucian RNA adalah proses yang mana RNA disucikan dari sampel biologi. Oleh kerana kehadiran ribonuclease dalam sel dan tisu, proses ini rumit. Enzim Ribonuclease mempunyai keupayaan untuk menurunkan RNA dengan cepat. Sifat kimia ribonukleases sangat stabil, dan sukar untuk menyahaktifkannya. Meneutralkan Ribonucleases adalah pilihan. Oleh kerana enzim ini ada di mana -mana sel dan tisu, teknik khas dibangunkan untuk pengekstrakan RNA. Daripada banyak kaedah, kaedah biasa adalah pengekstrakan guanidinium thiocynate-phenol-chloroform.

Rajah 02: Pengekstrakan RNA

Kaedah pengekstrakan guanidinium thiocynate-phenol-chloroform bergantung kepada pemisahan sentrifugasi dan fasa. Campuran yang akan disentrifkan terdiri daripada sampel berair dan larutan tepu air yang terdiri daripada fenol dan kloroform. Setelah disentrifugasi, penyelesaiannya terdiri daripada fasa akueus atas dan fasa organik yang lebih rendah di bawah keadaan pH neutral (pH 7-8). RNA hadir dalam fasa berair. Fasa organik biasanya terdiri daripada protein yang dibubarkan dalam fenol dan lipid yang dibubarkan dalam kloroform. Agen chaotropic (molekul yang mempunyai keupayaan untuk memecahkan ikatan hidrogen antara molekul air) ditambah; ini dikenali sebagai, guanidinium thiocyanate. Ejen ini mempunyai keupayaan untuk menafikan protein yang termasuk ribonukleases yang dapat merendahkan RNA dan terlibat dalam lisis sel. Ia juga memisahkan rRNA dari protein ribosom. Langkah terakhir pemurnian RNA adalah mencuci pemendakan fasa berair dengan etanol. RNA juga boleh disucikan menggunakan nitrogen cecair.

Apakah persamaan antara pengekstrakan DNA dan RNA?

• Kedua -dua proses pengekstrakan menggunakan bahan kimia berbahaya seperti fenol dan kloroform.
• Sentrifugasi adalah teknik penting untuk kedua -dua proses.
• Ethanol digunakan untuk mencuci endapan dan mendapatkan DNA atau RNA yang disucikan.

Apakah perbezaan antara pengekstrakan DNA dan RNA?

Ringkasan -Pengekstrakan DNA vs RNA

Pengekstrakan DNA dan RNA adalah aspek penting dalam prosedur eksperimen untuk kajian biologi molekul, genetik, dan bioteknologi. Kedua -dua proses melibatkan reagen yang sama, tetapi pengekstrakan RNA menggunakan reagen khas yang dikenali sebagai guanidium thiocyanate yang mengurangkan aktiviti ribonukleases. Ini adalah perbezaan utama antara pengekstrakan DNA dan RNA.

Muat turun versi pdf DNA vs pengekstrakan RNA

Anda boleh memuat turun versi PDF artikel ini dan menggunakannya untuk tujuan luar talian mengikut nota petikan. Sila muat turun versi PDF di sini perbezaan antara pengekstrakan DNA dan RNA

Rujukan:

1. Chomczynski, P, dan N Sacchi. "Kaedah satu langkah pengasingan RNA oleh asid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform pengekstrakan."Biokimia Analitik., U.S. Perpustakaan Perubatan Negara, APR. 1987, boleh didapati di sini. Diakses 31 Ogos. 2017
2. Hindawi. "DNA, RNA, dan Pengekstrakan Protein: Masa Lalu dan Kini."Biomed Research International, Hindawi, 30 Nov. 2009, boleh didapati di sini. Diakses 31 Ogos. 2017.

Ihsan gambar:

1. "DNA yang diekstrak dari alpukat" oleh Mike Seyfang - asalnya diposkan ke Flickr sebagai Kejayaan (CC oleh 2.0) melalui Commons Wikimedia
2. "Pengekstrakan Phoh-Chcl3" oleh Squidonius (Talk)-Kerja Sendiri (Teks Asal: Buatan Diri) (Domain Awam) melalui Commons Wikimedia