Perbezaan antara pembengkakan selatan dan barat utara

Perbezaan Utama - Utara vs Selatan vs Western Blotting
 

Pengesanan urutan tertentu DNA, RNA, dan protein adalah penting untuk pelbagai jenis kajian dalam biologi molekul. Elektroforesis gel adalah teknik yang memisahkan DNA, RNA, dan protein mengikut saiz mereka. Dari profil gel, urutan DNA tertentu, urutan RNA, atau protein dikesan oleh teknik khas yang dipanggil pembengkakan dan hibridisasi dengan probe berlabel. Terdapat tiga jenis kaedah pembengkakan yang berbeza iaitu selatan, utara dan barat. Perbezaan utama antara pembengkakan selatan dan barat utara terletak pada jenis molekul yang ia mengesan dari sampel. Southern Blotting adalah kaedah yang mengesan urutan DNA tertentu dari sampel DNA. Northern Blotting adalah teknik yang mengesan urutan RNA tertentu dari sampel RNA. Pembengkakan Barat adalah kaedah yang mengesan protein tertentu dari sampel protein.

Kandungan
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apa itu Selatan Blotting
3. Apa itu pembengkakan utara
4. Apa itu Barat membongkar
5. Perbandingan sampingan - Utara vs selatan vs Western Blotting
6. Ringkasan

Apa itu Selatan Blotting?

Teknik Blotting Selatan dibangunkan oleh E. M. Selatan pada tahun 1975 untuk mengenal pasti urutan DNA tertentu dari sampel DNA. Ini adalah teknik pembengkakan pertama yang diperkenalkan dalam biologi molekul. Ia membolehkan pengesanan gen tertentu dari DNA, serpihan tertentu dari DNA, dll. Terdapat beberapa langkah yang terlibat dalam teknik pembengkakan selatan. Mereka adalah seperti berikut.

1. DNA diasingkan dari sampel dan dicerna dengan endonucleases sekatan.
2. Sampel yang dicerna dipisahkan oleh elektroforesis gel agarose.
3. Serpihan DNA di dalam gel diseneri ke dalam helai tunggal dengan menggunakan larutan alkali.
4. DNA terkandas tunggal dipindahkan ke membran penapis nitrocellulose dengan memindahkan kapilari.
5. DNA yang dipindahkan ditetapkan ke membran secara kekal.
6. DNA tetap pada membran adalah hibrida dengan probe berlabel.
7. DNA Unbound dibasuh dari membran dengan mencuci.
8. Filem X-ray terdedah kepada membran dan autoradiografi disediakan.

Pembengkakan Selatan digunakan untuk pelbagai aspek biologi molekul. Ia berguna dalam pemetaan RFLP, kajian forensik, metilasi DNA dalam ekspresi gen, pengesanan gen bermutasi dalam gangguan genetik, cap jari DNA, dan lain -lain.

Rajah 01: Teknik Blotting Selatan

Apa itu pembengkakan utara?

Northern Blotting adalah kaedah yang direka untuk mengesan urutan RNA tertentu atau urutan mRNA dari sampel untuk mengkaji ekspresi gen. Teknik ini dibangunkan oleh Alwine, Kemp, dan Stark pada tahun 1979. Ia berbeza dari teknik pembengkakan sourthern dan barat kerana beberapa langkah. Walau bagaimanapun, teknik ini juga dilakukan melalui elektroforesis gel, pembengkakan, dan hibridisasi dengan probe dan pengesanan berlabel tertentu. Teknik Blotting Utara dilakukan seperti berikut.

1. RNA diekstrak dari sampel dan dipisahkan oleh elektroforesis gel.
2. RNA dipindahkan dari gel ke membran pembengkakan dan tetap.
3. Membran dirawat dengan siasatan berlabel yang disediakan dari cDNA atau RNA (siasatan adalah pelengkap kepada urutan tertentu dalam sampel).
4. Siasatan diinkubasi dengan membran untuk mengikat dengan urutan tertentu.
5. Probe Unbound dibasuh.
6. Serpihan hibrida dikesan oleh autoradiograph.

Pembengkakan Utara adalah alat penting dalam pengesanan dan kuantifikasi mRNA hibrid, mengkaji kemerosotan RNA, penilaian RNA separuh hayat, pengesanan splicing RNA, mengkaji ekspresi gen, dan lain-lain.

Rajah 02: pembengkakan utara

Apa itu Barat membongkar?

Blotting Barat adalah kaedah mengesan protein tertentu dari campuran protein dengan menggunakan antibodi berlabel. Oleh itu, Blot Barat juga dikenali sebagai Immunoblot. Teknik ini diperkenalkan oleh Towbin et al pada tahun 1979 dan kini secara rutin dilakukan di makmal untuk analisis protein. Langkah -langkah adalah seperti berikut.

1. Protein diekstrak dari sampel
2. Protein dipisahkan dengan saiz mereka menggunakan elektroforesis gel polyacrylamide
3. Molekul yang dipisahkan dipindahkan ke dalam membran PVDF atau membran nitrocellulose oleh elektroporasi
4. Membran disekat untuk mengikat tidak spesifik dengan antibodi
5. Protein yang dipindahkan terikat dengan antibodi utama (enzim berlabel antibodi).
6. Membran dibasuh untuk menghilangkan antibodi utama yang terikat secara tidak spesifik
7. Antibodi terikat dikesan dengan menambahkan substrat dan mengesan endapan berwarna terbentuk

Pembengkakan Barat berguna dalam mengesan antibodi anti-HIV dalam sampel serum manusia. Blot Barat juga boleh digunakan sebagai ujian pengesahan untuk jangkitan hepatitis B dan ujian muktamad untuk penyakit lembu gila.

Rajah 03: Pembengkakan Barat

Apakah perbezaan antara pembengkakan selatan dan barat utara?

Ringkasan -Utara vs Southern vs Western Blotting

Blotting adalah teknik khas yang dibangunkan untuk mengenal pasti DNA, RNA atau protein tertentu dari sampel. Terdapat tiga prosedur pembengkakan berasingan, iaitu utara, selatan dan barat, untuk mengesan jenis molekul tertentu. Teknik Blotting Utara direka untuk mengesan urutan RNA tertentu dari campuran RNA. Teknik pembengkakan selatan membolehkan pengesanan urutan DNA tertentu dari sampel DNA dan teknik pembengkakan Barat dibangunkan untuk mengenal pasti protein tertentu dari campuran protein.

Rujukan
1. Gibbons, Janay. "Blot Barat: Tinjauan Pemindahan Protein."Jurnal Sains Perubatan Amerika Utara. Mednow Publications & Media Pvt Ltd, Mar. 2014. Web. 27 Mac. 2017
2. Coklat, t. "Southern blotting."Protokol semasa dalam imunologi. U.S. Perpustakaan Perubatan Negara, Mei 2001. Web. 27 Mac. 2017
3. Dia, Shan L. "Blot Utara."Kaedah dalam enzimologi. U.S. Perpustakaan Perubatan Negara, 2013. Web. 27 Mac. 2017

Ihsan gambar:
1. "Skim Blot Utara" oleh RNA405 - Kerja Sendiri (Domain Awam) melalui Commons Wikimedia
2. "Western Blot 114a" oleh Amanthabagdon - Kerja Sendiri (Domain Awam) melalui Commons Wikimedia