Apakah perbezaan antara ujian PCR bersarang dan masa nyata konvensional

The Perbezaan utama antara ujian PCR bersarang dan masa nyata konvensional adalah bahawa PCR konvensional adalah teknik yang dibangunkan untuk menguatkan urutan tertentu DNA dan PCR bersarang adalah pengubahsuaian PCR konvensional yang terdiri daripada dua tindak balas amplifikasi berurutan, sementara PCR masa nyata adalah variasi PCR konvensional yang dapat mengukur produk yang diperkuatkan.

PCR adalah teknik saintifik yang sangat biasa digunakan secara meluas dalam penyelidikan dan perubatan untuk mengesan DNA. Ujian PCR digunakan untuk mengesan antigen dengan mengesan DNA atau RNA mereka. Umumnya, RNA virus hadir di dalam badan sebelum mengesan antibodi atau memaparkan gejala penyakit. Ujian PCR boleh memberitahu sama ada seseorang mempunyai virus awal atau tidak. Pada masa ini, PCR adalah ujian standard untuk mengesan penyakit covid-19. Terdapat pelbagai jenis teknik PCR seperti PCR masa nyata, PCR bersarang, PCR multiplex, PCR permulaan panas dan PCR jarak jauh, dll.

Kandungan

1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apakah ujian PCR konvensional
3. Apakah ujian PCR bersarang
4. Apakah ujian PCR masa nyata
5. Persamaan -Pengujian PCR bersarang dan masa nyata konvensional
6. Konvensional vs bersarang vs ujian PCR masa nyata dalam bentuk jadual
7. Ringkasan -Konvensional vs bersarang vs ujian PCR masa nyata

Apakah ujian PCR konvensional?

Ujian PCR konvensional adalah in vitro Teknik penguatan DNA secara rutin dilakukan di makmal biologi molekul. Kaedah ini membolehkan pengeluaran beribu -ribu hingga berjuta -juta salinan serpihan DNA tertentu. Kary Mullis memperkenalkan teknik ini pada tahun 1980. Teknik ini memerlukan serpihan DNA yang dikenali sebagai templat untuk membuat banyak salinannya. Polimerase Taq berfungsi sebagai enzim polimerase DNA dan memangkinkan sintesis helai baru dari urutan templat.

Primer dalam campuran PCR akan berfungsi sebagai titik permulaan untuk sambungan serpihan. Semua bahan yang diperlukan untuk membuat salinan DNA dimasukkan dalam campuran PCR. Reaksi PCR dijalankan dalam mesin PCR, dan ia harus diberi makan dengan campuran PCR yang betul dan program PCR yang betul. Sekiranya campuran tindak balas dan program betul, ia akan menghasilkan bilangan salinan yang diperlukan dari seksyen tertentu DNA dari sejumlah kecil DNA.

Rajah 01: Ujian PCR konvensional

Terdapat tiga langkah utama yang terlibat dalam tindak balas PCR: denaturasi, penyepuh primer, dan lanjutan helai. Tiga langkah ini berlaku pada tiga suhu yang berbeza. Penampan PCR mengekalkan keadaan yang optimum untuk tindakan polimerase Taq. Tiga peringkat reaksi PCR ini diulang untuk menghasilkan jumlah produk PCR yang diperlukan. Pada setiap tindak balas PCR, bilangan salinan DNA berganda. Oleh itu, penguatan eksponen dapat diperhatikan di PCR. Produk PCR dapat diselesaikan menggunakan elektroforesis gel kerana ia menghasilkan jumlah DNA yang dapat dilihat pada gel, dan ia dapat disucikan untuk kajian lanjut seperti penjujukan.

PCR adalah alat yang berharga dalam penyelidikan perubatan dan biologi. Terutama dalam kajian forensik, PCR mempunyai nilai yang besar kerana ia dapat menguatkan DNA untuk kajian dari sampel kecil penjenayah dan membuat profil DNA forensik. PCR digunakan secara meluas dalam banyak bidang biologi molekul termasuk, genotyping, pengklonan gen, pengesanan mutasi, penjujukan DNA, microarrays DNA, dan ujian paterniti.

Apakah ujian PCR bersarang?

PCR bersarang adalah jenis PCR yang mengurangkan penguatan DNA yang tidak spesifik. Terdapat dua PCR berturut -turut atau dua tindak balas penguatan berurutan dalam ujian PCR bersarang. Semasa tindak balas penguatan pertama, produk PCR dihasilkan. Selepas reaksi pertama, tindak balas penguatan kedua dilakukan pada produk PCR reaksi pertama. Oleh itu, primer dalam campuran reaksi kedua mengikat dengan produk PCR pertama dan menguatkannya.

Rajah 02: PCR bersarang

Pasangan primer berbeza dalam setiap tindak balas. Pengikatan primer yang tidak spesifik dikurangkan dalam PCR bersarang. Pengujian PCR bersarang berguna untuk meningkatkan kepekaan dan/atau kekhususan. Walau bagaimanapun, PCR bersarang memerlukan pengetahuan mengenai urutan yang berminat.

Apakah ujian PCR masa nyata?

PCR masa nyata atau PCR kuantitatif (Q PCR) adalah versi PCR yang diubahsuai yang mengukur produk PCR secara kuantitatif. Oleh itu, teknik ini mengukur penguatan dalam masa nyata menggunakan mesin PCR masa nyata. Ia juga merupakan kaedah yang sesuai untuk menentukan jumlah urutan sasaran atau gen yang ada dalam sampel.

Ciri menarik PCR masa nyata adalah bahawa ia menggabungkan kedua-dua penguatan dan kuantifikasi yang benar ke dalam satu langkah. Oleh itu, keperluan untuk elektroforesis gel untuk pengesanan dapat dihapuskan oleh teknik PCR masa nyata. Penggunaan pewarna pendarfluor untuk melabelkan produk PCR semasa tindak balas PCR akhirnya akan membawa kepada kuantiti langsung. Apabila produk PCR terkumpul, isyarat pendarfluor juga terkumpul, dan ia akan diukur oleh mesin masa nyata. Sybr Green dan Taqman adalah dua kaedah untuk mengesan atau menonton proses penguatan PCR masa nyata. Kedua-dua kaedah memantau kemajuan proses penguatan dan melaporkan kuantiti produk dalam masa nyata.

Rajah 03: PCR masa nyata

PCR masa nyata mempunyai pelbagai aplikasi seperti kuantifikasi ekspresi gen, mikroRNA dan analisis RNA bukan pengekodan, genotip SNP, pengesanan varian nombor salinan, pengesanan mutasi yang jarang berlaku, pengesanan organisma yang diubahsuai secara genetik, dan pengesanan agen berjangkit.

Apakah persamaan antara ujian PCR bersarang dan masa nyata konvensional?

• Pengujian PCR bersarang dan masa nyata adalah pengubahsuaian ujian PCR konvensional.
• Ketiga -tiga teknik ini menguatkan sampel DNA.
• Produk mereka boleh digunakan dalam penjujukan atau analisis.
• Ujian ini memerlukan primer.

Apakah perbezaan antara ujian PCR bersarang dan masa nyata konvensional?

PCR konvensional adalah teknik yang dibangunkan untuk menguatkan urutan tertentu DNA. Sementara itu, PCR bersarang adalah pengubahsuaian PCR konvensional yang terdiri daripada dua tindak balas amplifikasi berurutan, dan PCR masa nyata adalah varian PCR konvensional yang dapat mengukur produk yang diperkuatkan.  Jadi, ini adalah perbezaan utama antara ujian PCR bersarang dan masa nyata konvensional. Tidak seperti PCR konvensional dan masa nyata, PCR bersarang menggunakan dua set primer. Selain itu, terdapat dua tindak balas amplifikasi berturut-turut dalam PCR bersarang untuk mengurangkan penguatan tidak khusus. Selain itu, ujian PCR konvensional dan masa nyata tidak mengandungi dua tindak balas penguatan berurutan.

Infographic berikut menyenaraikan perbezaan antara ujian PCR bersarang dan masa nyata konvensional dalam bentuk tabular untuk perbandingan sampingan.

Ringkasan -Konvensional vs bersarang vs ujian PCR masa nyata

PCR konvensional adalah teknik pertama yang dibangunkan untuk menguatkan serpihan tertentu DNA. PCR bersarang dan PCR masa nyata adalah dua varian PCR konvensional. Terdapat dua tindak balas penguatan berurutan dan penggunaan dua set primer dalam PCR bersarang. PCR masa nyata dibangunkan untuk mengukur produk PCR yang diperkuatkan. Oleh itu, ini meringkaskan perbezaan antara ujian PCR bersarang dan masa nyata konvensional.

Rujukan:

1. Green Mr, Sambrook J. "Reaksi rantai polimerase bersarang (PCR)."Protokol Pelabuhan Cold Spring, u.S. Perpustakaan Perubatan Negara.
2. "Reaksi rantai polimerase masa nyata."Gambaran Keseluruhan | Topik Sciencedirect.

Ihsan gambar:

1. "Reaksi rantai polimerase" oleh Enzoklop - Kerja Sendiri (CC BY -SA 3.0) melalui Commons Wikimedia
2. "PCR bersarang" oleh Zephyris di Wikipedia Bahasa Inggeris (CC BY-SA 3.0) melalui Commons Wikimedia
3. "PCR Masa Nyata" oleh İnformatic - Kerja Sendiri (CC BY -SA 3.0) melalui Commons Wikimedia