Apakah perbezaan antara ujian kolorimetrik dan fluorometrik

The Perbezaan utama antara assay colorimetric dan fluorometrik Adakah ujian kolorimetrik menentukan kepekatan sebatian berwarna dalam larutan manakala ujian fluorometrik menentukan mekanisme kinetik penyelesaian.

Ujian biokimia adalah teknik yang mengesan atau mengukur aktiviti molekul biologi atau bahan analitik. Ia adalah in vitro proses. Assay colorimetric dan ujian fluorometrik adalah dua jenis ujian biokimia biasa yang dijalankan di makmal. Pelbagai teknik seperti ELISA dan pembengkakan Barat juga merupakan ujian biokimia yang kompleks untuk kuantifikasi aktiviti metabolik dan pengukuran tingkah laku fungsional biomolekul seperti protein, enzim, dan molekul kecil lain. Jenis ujian ini digunakan untuk mengenal pasti protein-DNA, protein-RNA, dan interaksi protein-protein.

Kandungan

1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apa itu ujian kolorimetrik
3. Apakah ujian fluorometrik
4. Persamaan - ujian colorimetric dan fluorometrik
5. Colorimetric vs fluorometric assays dalam bentuk jadual
6. Ringkasan

Apa itu ujian kolorimetrik?

Ujian kolorimetrik adalah teknik yang menentukan kepekatan sebatian berwarna dalam penyelesaian. Dalam erti kata lain, assay colorimetric adalah tindak balas yang membawa kepada perubahan warna disebabkan oleh tindak balas enzimatik atau kimia antara reagen dan analisis. Ujian Colorimetric diamalkan dalam Biokimia untuk Menguji Enzim, Sebatian Khusus, Hormon, Antibodi dan Analisis Lain. Mereka menggunakan colorimeters atau spektrofotometer. Colorimeters adalah instrumen yang mencirikan sampel berwarna untuk memberikan ukuran objektif ciri -ciri warna. Spektrofotometer adalah peranti yang mengukur intensiti cahaya sebagai fungsi warna atau panjang gelombang cahaya.

Rajah 01: Ujian Colorimetric

Bagaimana ujian colorimetric berfungsi?

Dalam ujian warna, pinggan disediakan dengan antibodi tertentu yang terikat kepada telaga. Kemudian sampel ditambah. Ini mungkin membenarkan sampel mengikat antibodi. Kemudian antibodi pengesanan dan substrat ditambah ke telaga untuk bertindak balas dengan siasatan pengesanan. Penyelesaian berhenti ditambah pada akhir sebelum bacaan. Telaga kosong yang dipanggil kosong ditinggalkan tanpa sampel. Dalam ujian warna, warna yang lebih gelap, semakin besar kepekatan analit. Biasanya, hanya satu panjang gelombang yang diperlukan untuk mengambil bacaan. Tetapi jika terdapat pengukuran rujukan, dua atau lebih panjang gelombang digunakan.

Apakah ujian fluorometrik?

Ujian fluorometrik adalah teknik yang menentukan mekanisme kinetik reaksi enzim. Ujian fluorometrik berlaku dengan pembentukan produk pendarfluor dari substrat tanpa fluorescent atau sebaliknya. Ujian ini juga menggunakan pemindahan tenaga resonans pendarfluor (FRET) di mana, tindak balas enzimatik mengubah kedudukan dua fluorophores dalam substrat dengan itu, mengubah intensiti pendarfluor.

Rajah 02: Ujian fluorometrik

Ujian fluorometrik pada umumnya lebih sensitif daripada ujian lain. Anggaran enzim diagnostik dalam sampel tisu, sel, atau cecair pesakit meningkat disebabkan oleh sensitiviti yang lebih tinggi.

Bagaimana ujian fluorometrik berfungsi?

Dalam ujian fluorometrik, substrat ditambah ke sampel dalam plat, dan tindak balas pendarfluor diambil menggunakan pembaca plat. Di sini, setiap sel diukur secara berasingan. Plat legap digunakan dalam ujian fluorometrik. Ini mengurangkan penyebaran cahaya. Dua panjang gelombang diperlukan untuk jenis ujian ini. Satu panjang gelombang adalah untuk mengesan pengujaan dan panjang gelombang yang lain adalah untuk pelepasan.

Apakah persamaan antara ujian kolorimetrik dan fluorometrik?

• Assay colorimetric dan ujian fluorometrik adalah dua jenis ujian biokimia.
• Kedua -dua ujian dijalankan untuk diagnostik perubatan.
• Ujian ini melibatkan tindak balas enzimatik.
• Kedua -dua ujian melibatkan substrat dan analisis.

Apakah perbezaan antara ujian kolorimetrik dan fluorometrik?

Ujian kolorimetrik adalah teknik yang menentukan kepekatan sebatian berwarna dalam larutan, sementara ujian fluorometrik adalah teknik yang menentukan mekanisme kinetik reaksi enzim. Jadi, ini adalah perbezaan utama antara ujian kolorimetrik dan fluorometrik. Selain itu, ujian fluorometrik lebih sensitif daripada ujian kolorimetrik; Oleh itu, ujian fluorometrik mempunyai keupayaan untuk mengesan lebih banyak analisis. Oleh itu, ini adalah satu lagi perbezaan penting antara ujian kolorimetrik dan fluorometrik. Tambahan pula, ujian fluorometrik memerlukan dua panjang gelombang, sementara ujian kolorimetrik dijalankan dengan satu panjang gelombang.

Infographic di bawah ini lebih banyak perbezaan antara ujian kolorimetrik dan fluorometrik.

Ringkasan -Colorimetric vs Fluorometric Assay

Ujian biokimia adalah proses analisis yang digunakan untuk menentukan dan mengukur tindak balas metabolik selular. Assay colorimetric dan ujian fluorometrik adalah dua jenis ujian biokimia. Ujian Colorimetric adalah tindak balas yang membawa kepada perubahan warna disebabkan oleh tindak balas enzimatik atau kimia antara reagen dan analisis manakala ujian fluorometrik adalah teknik yang digunakan untuk menentukan mekanisme kinetik reaksi enzim.  Kedua -dua ujian bergantung kepada tindak balas enzimatik yang melibatkan substrat dan analit. Ujian fluorometrik lebih sensitif daripada ujian warna. Paling penting, ujian fluorometrik memerlukan dua panjang gelombang, manakala ujian kolorimetrik boleh dilakukan dengan hanya satu panjang gelombang. Oleh itu, ini meringkaskan perbezaan antara ujian warna dan fluorometrik.

Rujukan:

1. "Ujian Colorimetric."Biosains Eksperimen.
2. "Ujian enzim fluorometrik."Enzim kreatif.

Ihsan gambar:

1. "Ujian Colorimetric" oleh Sepehr Ehsani (CC BY-NC-ND 2.0) melalui Flickr
2. "Fluorimeter" oleh Matthias m. - Kerja Sendiri (CC oleh 3.0) melalui Commons Wikimedia