Perbezaan antara halaman SDS dan halaman asli

Perbezaan utama - SDS Page vs Native Halaman
 

SDS dan halaman asli adalah dua jenis teknik elektroforesis gel polyacrylamide yang digunakan dalam biologi molekul. The Perbezaan utama Antara halaman SDS dan halaman asli adalah jenis gel polyacrylamide yang digunakan. Di halaman SDS, gel denaturing digunakan, oleh itu, molekul dipisahkan berdasarkan berat molekul mereka. Sebaliknya, di halaman asli, gel tidak digunakan digunakan. Oleh itu, molekul dipisahkan berdasarkan saiz, caj dan bentuknya.

Elektroforesis gel polyacrylamide (Page) menggunakan gel yang dibuat oleh pemolimeran monomer acrylamide dengan metilena bisacrylamide. Polyacrylamide lebih sukar dan lebih stabil haba daripada agarose. Gel polyacrylamide mempunyai saiz liang yang lebih kecil yang membolehkan pemisahan protein yang cekap. Terdapat dua jenis utama setup halaman iaitu halaman SDS dan halaman asli. Halaman SDS atau Elektroforesis gel polyacrylamide sodium-dodecyl sulfat memisahkan protein berdasarkan berat molekul mereka. Gel denaturing digunakan di halaman SDS. Halaman asli menggunakan gel bukan denaturing dan memisahkan protein berdasarkan saiz, caj dan bentuknya (penyesuaian 3D).

Kandungan

1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apa itu halaman SDS
3. Apa itu halaman asli
4. Persamaan antara halaman SDS dan halaman asli
5. Perbandingan sampingan - SDS Page vs halaman asli dalam bentuk jadual
6. Ringkasan

Apa itu halaman SDS?

Halaman SDS adalah teknik elektroforetik yang paling biasa digunakan untuk memisahkan protein berdasarkan berat molekul mereka. Gel dibuat dengan menambahkan SDS (natrium dodecyl sulfate), yang merupakan detergen. Protein SDS gigi palsu menjadi monomer. SDS adalah detergen anionik. Oleh itu, ia menambah caj negatif bersih kepada protein dalam julat pH yang luas. Apabila caj negatif bersih diberikan kepada molekul protein, disebabkan oleh variasi caj, struktur kompleks dipecahkan. Oleh kerana caj negatif, protein menarik ke arah akhir positif. Oleh itu, molekul dengan perjalanan berat molekul yang lebih rendah lebih cepat pada matriks gel dan dapat dilihat dekat dengan anod, sedangkan protein berat molekul yang lebih tinggi diperhatikan lebih dekat dengan telaga.

Rajah 01: Halaman SDS

SDS yang mengikat rantaian polipeptida adalah berkadar dengan jisim molekul relatifnya. Oleh itu, jisim molekul juga boleh ditentukan melalui halaman SDS. Pewarnaan gel halaman SDS dilakukan oleh pewarnaan biru bromophenol. Aplikasi julat halaman SDS ke tahap yang lebih besar di mana ia boleh digunakan untuk menganggarkan jisim molekul relatif dan untuk menentukan kelimpahan protein relatif dalam campuran protein. Halaman SDS juga boleh digunakan untuk menentukan taburan protein dalam campuran protein. Halaman SDS juga digunakan untuk membersihkan dan menilai protein. Ia digunakan sebagai prosedur awal untuk pembengkakan dan hibridisasi Barat, yang seterusnya digunakan untuk pemetaan dan pengenalan protein.

Apa itu halaman asli?

Elektroforesis gel polyacrylamide asli (halaman asli) menggunakan gel bukan -. Oleh itu, SD atau mana -mana ejen denaturing lain tidak ditambah ke matriks gel. Di halaman asli, pemisahan protein berdasarkan caj dan saiz protein. Oleh itu, pergerakan protein bergantung kepada caj dan saiz protein.

Tuduhan protein bergantung pada rantai sampingan asid amino. Sekiranya rantai sampingan dicas secara negatif, protein akan menerima caj negatif keseluruhan dan sebaliknya. Protein mengekalkan penyesuaian 3D kerana lipatan yang berlaku. Hasil lipatan dari beberapa jenis bon dalam protein seperti ikatan disulfida, interaksi hidrofobik dan ikatan hidrogen. Oleh itu, jika halaman asli dibawa pada pH neutral, protein akan dipisahkan mengikut bentuk molekul protein. Oleh itu, halaman asli boleh digunakan sebagai teknik sensitif untuk mengesan perubahan yang bertanggungjawab atau pengesahan protein.

Kelebihan utama halaman asli ialah protein yang digunakan untuk analisis halaman dapat dipulihkan dalam keadaan asalnya selepas analisis halaman, kerana protein tidak terganggu semasa proses. Halaman asli adalah teknik throughput yang agak tinggi, dan kestabilan protein meningkat.

Rajah 02: Halaman asli

Setelah selesai gel, gel halaman asli dapat dilihat dengan pewarnaan dengan bromophenol biru atau mana -mana reagen pewarnaan yang sesuai. Aplikasi halaman asli termasuk pemisahan protein berasid termasuk glikoprotein seperti erythropoietin rekombinan manusia atau pengenalpastian protein yang terdapat dalam albumin serum lembu (BSA).

Apakah persamaan antara halaman SDS dan halaman asli?

• Kedua -dua halaman SDS dan sistem halaman asli menggunakan gel polyacrylamide sebagai matriks gel.
• Kedua -duanya digunakan untuk pemisahan dan pengenalpastian protein.
• Kedua -duanya menggunakan mobiliti elektroforetik untuk memisahkan sebatian.
• Kedua -duanya boleh dilakukan secara menegak atau cara mendatar (kebanyakannya dilakukan sebagai persediaan halaman menegak kerana panjang jangka panjang).
• Alat elektroforesis termasuk tangki gel, sikat, bekalan kuasa diperlukan untuk operasi kedua -dua teknik.
• Penggambaran gel boleh dilakukan dengan kaedah pewarnaan dalam kedua -dua teknik.

Apakah perbezaan antara halaman SDS dan halaman asli?

Ringkasan - SDS Page vs Native Halaman

Halaman SDS dan halaman asli adalah dua jenis teknik elektroforesis gel polyacrylamide yang digunakan untuk memisahkan protein. Halaman SDS dirawat dengan detergen yang disebut SDS. SDS memberikan caj negatif secara keseluruhan kepada protein, yang kemudiannya mengakibatkan denaturasi protein. Oleh itu, protein dipisahkan berdasarkan berat molekul mereka. Sebaliknya, teknik halaman asli tidak menggunakan ejen denaturing. Oleh itu, protein sama ada dipisahkan berdasarkan saiz atau bentuknya. Ini adalah perbezaan antara halaman SDS dan halaman asli.

Rujukan:

1."Prinsip dan kaedah elektroforesis gel polyacrylamide (SDS-PAGE)."Prinsip dan kaedah elektroforesis gel polyacrylamide (SDS-PAGE) | MBL Life Sience -Asia-. Terdapat di sini
2."Gel asli."Makmal Protein Alliance | Perkhidmatan Pencirian Biophysical. Terdapat di sini  

Ihsan gambar:

1.'Electrophoresis SDS-PAGE' Bensaccount di Wikipedia Inggeris, (CC oleh 3.0) melalui Commons Wikimedia  
2.'Muatkan sampel ke dalam elektroforesis gel polyacrylamide dengan baik Blaz Nemec dari Ljubljana, Slovenia (CC BY-SA 2.0) melalui Commons Wikimedia