Perbezaan antara RAPD dan RFLP
Perbezaan utama - RAPD vs RFLP
Penanda genetik digunakan dalam biologi molekul untuk mengenal pasti variasi genetik antara individu dan spesies. DNA polimorfik yang diperkuat secara rawak (Rapd) dan Polimorfisme Panjang Fragmen Sekatan (RFLP) adalah dua penanda molekul penting yang digunakan secara rutin di makmal. RAPD dilakukan dengan primer oligonukleotida pendek dan sewenang -wenangnya, dan ia berdasarkan penguatan rawak pelbagai lokasi di seluruh DNA templat organisma. RFLP dilakukan dengan endonuclease sekatan tertentu, dan ia berdasarkan polimorfisme yang mengakibatkan serpihan sekatan dan hibridisasi. Perbezaan utama antara RAPL dan RFLP ialah RAPD adalah jenis teknik PCR yang dilakukan tanpa pengetahuan urutan sebelumnya sedangkan RFLP tidak terlibat dalam PCR dan memerlukan pengetahuan urutan sebelumnya untuk menjalankan teknik.
Kandungan
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apa itu RAPD
3. Apa itu RFLP
4. Perbandingan sampingan - RAPD vs RFLP
5. Ringkasan
Apa itu RAPD?
RAPD adalah penanda molekul yang berguna dalam biologi molekul. Ia adalah teknik yang cepat dan mudah. RAPD boleh ditakrifkan sebagai kaedah yang mengakibatkan urutan DNA polimorfik akibat penguatan rawak pelbagai lokasi templat DNA sasaran. RAPD menggunakan primer oligonukleotida pendek dengan urutan sewenang -wenangnya untuk penguatan PCR. Primer disintesis buatan tanpa pengetahuan urutan sebelumnya. Oleh itu, ia dianggap sebagai teknik yang mudah dan berguna.
Langkah -langkah utama berikut terlibat dalam RAPD.
- Pengekstrakan DNA sasaran
- Penguatan pelbagai lokasi DNA sasaran menggunakan primer yang dipilih secara rawak
- Elektroforesis gel produk PCR yang diperkuatkan
- Pewarnaan dengan etidium bromida dan mengenal pasti polimorfisme
Hasil daripada variasi dalam penyepuh primer, serpihan yang berbeza dengan panjang yang berbeza dihasilkan semasa penguatan. Oleh itu, corak banding pada gel berbeza di kalangan individu dan spesies. Oleh itu, RAPD membolehkan pengesanan variasi genetik di kalangan organisma dalam pengenalan dan pembezaan.
RAPD digunakan dalam pelbagai kajian biologi molekul seperti mengenal pasti perbezaan genetik antara spesies yang berkait rapat, pemetaan gen, cap jari DNA, pengenalpastian penyakit yang diwarisi, dan lain -lain.
Rajah 01: RAPD
Apa itu RFLP?
Polimorfisme Panjang Fragmen Sekatan (RFLPS) adalah penanda molekul yang digunakan dalam biologi molekul untuk mengenal pasti variasi genetik dalam urutan DNA homologus. Ini adalah penanda genetik pertama yang dibangunkan untuk cap jari DNA. Semua organisma menghasilkan profil DNA yang unik apabila dihadkan dengan enzim sekatan tertentu. RFLP berfungsi sebagai alat penting dalam menghasilkan profil DNA unik individu dan pengesanan variasi genetik di antara mereka. Apabila sampel DNA dicerna dengan endonucleases sekatan tertentu, ia menghasilkan profil DNA yang berbeza yang unik untuk setiap individu. Oleh itu, pengetua kaedah ini adalah pengesanan variasi genetik di kalangan organisma dengan menyekat DNA homolog dengan enzim sekatan tertentu dan analisis polimorfisme panjang serpihan melalui elektroforesis gel dan pembengkakan. Corak pembengkakan adalah unik untuk setiap organisma dan mencirikan genotip tertentu.
Langkah -langkah berikut terlibat dengan RFLP.
- Pengasingan jumlah DNA yang mencukupi dari sampel
- Pemecahan sampel DNA dengan endonukleases sekatan tertentu ke dalam urutan pendek
- Pemisahan serpihan yang dihasilkan dengan panjang yang berbeza oleh elektroforesis gel agarose.
- Pemindahan profil gel ke dalam membran oleh pembengkakan selatan
- Hibridisasi membran dengan probe berlabel dan analisis polimorfisme panjang serpihan dalam setiap profil
RFLP mempunyai pelbagai aplikasi seperti diagnosis penyakit warisan, pemetaan genom, pengenalan jenayah dalam kajian forensik, ujian paterniti, dll.
Rajah 02: Genotyping RFLP
Apakah perbezaan antara RAPD dan RFLP?
RAPD vs RFLP | |
| RAPD adalah penanda molekul berdasarkan primer rawak dan PCR. | RFLP adalah penanda molekul berdasarkan pengeluaran serpihan sekatan panjang yang berbeza. |
| Sampel yang diperlukan | |
| Sampel DNA kecil cukup untuk analisis RAPD. | Sebilangan besar sampel DNA yang diekstrak diperlukan untuk analisis RFLP. |
| Masa | |
| RAPD adalah proses yang cepat. | RFLP adalah proses yang memakan masa. |
| Penggunaan primer | |
| Primer rawak digunakan dan primer yang sama boleh digunakan untuk spesies yang berbeza. | Probe khusus spesies digunakan dalam RFLP untuk hibridisasi. |
| Kebolehpercayaan | |
| Kebolehpercayaan teknik kurang dibandingkan dengan RFLP. | RFLP adalah teknik yang boleh dipercayai. |
| Membongkar | |
| RAPD melibatkan pembengkakan selatan. | Southern Blotting adalah satu langkah RFLP. |
| Pengesanan variasi alel | |
| Variasi alel tidak dapat dikesan oleh RAPD. | Variasi alel dapat dikesan oleh RFLP. |
| Perlu pengetahuan urutan | |
| RAPD tidak memerlukan pengetahuan urutan sebelumnya. | Pengetahuan urutan terdahulu diperlukan untuk merancang siasatan. |
| PCR | |
| PCR terlibat dengan RAPD | PCR tidak terlibat dengan RFLP. |
| Kebolehulangan semula | |
| RAPD mempunyai kebolehulangan yang rendah | RFLP mempunyai kebolehulangan yang tinggi berbanding RAPD. |
Ringkasan -RAPD vs RFLP
RAPD dan RFLP adalah penanda penting yang digunakan dalam biologi molekul. Kedua -dua kaedah mampu mengesan variasi genetik di kalangan organisma. RAPD dilakukan menggunakan primer rawak. RFLP dilakukan menggunakan enzim sekatan tertentu. Kedua -dua kaedah menghasilkan profil DNA yang unik untuk organisma individu. RAPD terlibat dengan beberapa langkah daripada RFLP. Tetapi ia menghasilkan hasil yang kurang dipercayai dan boleh dihasilkan daripada RFLP. Ini adalah perbezaan utama antara RAPD dan RFLP.
Rujukan:
1. Dos, j. B., J. Nienhuis, ms. Skroch, j. Tivang, dan m. K. Slocum. "Perbandingan penanda genetik RAPD dan RFLP dalam menentukan persamaan genetik di kalangan Brassica oleracea l. genotip."Tag. Genetik teori dan diterapkan. Theoretische und angewandte genetik. U.S. Perpustakaan Perubatan Negara, Mar. 1994. Web. 12 Apr. 2017
2. Powell, Wayne, Michele Morgante, Chaz Andre, Michael Hanafey, Julie Vogel, Scott Tingey, dan Antoni Rafalski. "Perbandingan RFLP, RAPD, AFLP
Ihsan gambar:
1. "Genotyping RFLP" oleh (tidak diketahui) - Institut Kesihatan Nasional (Domain Awam) melalui Commons Wikimedia
