Perbezaan antara halaman SDS dan Blot Barat
Perbezaan utama - SDS Page vs Western Blot
Pembengkakan Barat adalah teknik yang mengesan protein tertentu dari sampel protein. Teknik ini dilakukan melalui beberapa langkah utama: elektroforesis gel, pembengkakan, dan hibridisasi. Elektroforesis gel polyacrylamide natrium dodecil sulfat (Halaman SDS) adalah sejenis teknik elektroforesis gel yang digunakan untuk memisahkan protein mengikut saiz mereka (berat molekul). Western Blot adalah lembaran khas membran pembengkakan yang digunakan untuk memindahkan corak protein yang sama di halaman SDS. Perbezaan utama antara halaman SDS dan blot barat ialah Halaman SDS membolehkan pemisahan protein dalam campuran manakala Blot Barat membolehkan pengesanan dan kuantifikasi protein tertentu dari campuran. Kedua -duanya berguna dalam kajian analisis protein.
Kandungan
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apa itu halaman SDS
3. Apa itu Blot Barat
4. Perbandingan sampingan - SDS Page vs Western Blot
5. Ringkasan
Apa itu halaman SDS?
Halaman SDS adalah teknik elektroforesis gel yang digunakan untuk pemisahan protein. Ia biasanya digunakan dalam biokimia, genetik, forensik dan biologi molekul. Sebaik sahaja protein diekstrak dari sampel, mereka dijalankan pada gel yang terdiri daripada SDS dan polyacrylamide. SDS adalah detergen anionik yang digunakan untuk linearize protein (protein denatur) dan untuk memberikan caj negatif kepada protein linearized berkadar dengan jisim molekul mereka. Polyacrylamide menjadi sokongan kukuh untuk gel. Protein denatured yang dicas negatif berhijrah ke arah akhir positif radas melalui gel. Mengikut saiz protein, kelajuan berpindah berbeza di antara protein dan pemisahan berlaku. Oleh itu, halaman SDS berguna untuk pemisahan protein individu berdasarkan saiz mereka.
Penyediaan gel polyacrylamide untuk pecahan protein adalah langkah penting dalam halaman SDS. Kepekatan polyacrylamide yang betul dan jenis ejen silang yang digunakan sangat mempengaruhi sifat fizikal gel, yang menjadikan pemisahan sebenar protein yang berbeza. Saiz liang gel harus diuruskan dengan betul untuk pemisahan yang berkesan. Walau bagaimanapun, halaman SDS dianggap sebagai teknik pemisahan protein resolusi tinggi.
Teknik halaman SDS mempunyai batasan utama dalam analisis protein. Oleh kerana protein SDS Denatures Sebelum pemisahan, ia tidak membenarkan pengesanan aktiviti enzimatik, interaksi mengikat protein, cofactor protein, dan lain -lain.
Rajah 01: Halaman SDS
Apa itu Blot Barat?
Teknik pembengkakan Barat membolehkan pengesanan protein tertentu dari campuran protein dan pengukuran kuantiti dan berat molekul protein. Blot Barat adalah membran yang digunakan semasa prosedur pembengkakan untuk mendapatkan imej cermin corak protein dalam gel SDS-polyacrylamide. Membran yang digunakan untuk pembengkakan Barat kebanyakannya terdiri daripada nitrocellulose atau polyvinylidene difluoride (PVDF). Membran dengan protein yang dipindahkan boleh digunakan untuk mengenal pasti protein yang dikehendaki. Ia memerlukan antibodi berkualiti tinggi untuk mengesan protein yang dikehendaki oleh hibridisasi. Antibodi mengikat antigennya yang spesifik dan mendedahkan kehadiran antigen yang dikehendaki yang merupakan protein.
Memindahkan protein dari gel polyacrylamide SDS ke blot barat dilakukan oleh electroblotting. Ini adalah kaedah yang berkesan dan cepat yang menyebabkan protein ke elektrofor keluar dari gel dan melepasi membran nitrocellulose (blot barat).
Rajah 02: Blot Barat
Apakah perbezaan antara halaman SDS dan Blot Barat?
SDS Page vs Western Blot | |
| Halaman SDS adalah teknik elektroforesis gel. | Blot Barat adalah teknik yang dilakukan pada membran untuk mengesan protein tertentu dari campuran. |
| Gunakan | |
| Halaman SDS membolehkan pemisahan protein mengikut saiz mereka. | Blot Barat membolehkan pemindahan protein pada gel halaman SDS tanpa mengubah coraknya & membolehkan hibridisasi dengan antibodi tertentu. |
| Kekurangan | |
| Denaturasi protein, kos tinggi, dan kehadiran bahan kimia neurotoksin adalah kelemahan teknik ini. | Teknik ini memakan masa dan memerlukan keadaan terkawal peribadi dan khusus yang berpengalaman. |
Ringkasan -SDS Page vs Western Blot
SDS Page dan Western Blot adalah dua kaedah yang terlibat dalam analisis protein. Halaman SDS membolehkan pemisahan protein mudah pada gel mengikut berat molekul mereka. Blot Barat membantu mengesahkan kehadiran dan kuantiti protein tertentu melalui hibridisasi dengan antibodi tertentu. Ini adalah perbezaan antara halaman SDS dan blot barat.
Rujukan:
1. Blancher, c., dan a. Jones. "Teknik SDS -Page dan Barat."Kaedah dalam Perubatan Molekul. U.S. Perpustakaan Perubatan Negara, n.d. Web. 27 Mac. 2017
2. Nowakowski, Andrew B., William j. Wobig, dan David H. Petering. "SDS-PAGE Asli: Pemisahan Elektroforetik Resolusi Tinggi Protein dengan Pengekalan Sifat Asli termasuk ion logam terikat."Metallomics: Sains Biometal Bersepadu. U.S. Perpustakaan Perubatan Negara, Mei 2014. Web. 27 Mac. 2017.
Ihsan gambar:
1. "Elektroforesis SDS-PAGE" oleh Bensaccount di Wikipedia Inggeris (CC oleh 3.0) melalui Commons Wikimedia
2. "Western Blot 114a" oleh Amanthabagdon - Kerja Sendiri (Domain Awam) melalui Commons Wikimedia
