Perbezaan antara terjemahan nick dan lanjutan primer

Perbezaan utama - Nick Translation vs Primer Extension
 

Nick Translation and Primer Extension adalah dua teknik penting yang dilakukan dalam Biologi Molekul. Perbezaan utama antara terjemahan Nick dan lanjutan primer ialah Proses Terjemahan Nick Menghasilkan Probe berlabel untuk Teknik Hibridisasi Lain manakala Kaedah pelanjutan primer mengenal pasti urutan RNA tertentu dari campuran dan mendedahkan maklumat mengenai ekspresi mRNA. Kedua -dua teknik ini sangat penting dan dilakukan secara rutin dalam makmal penyelidikan molekul.

Kandungan
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apa itu terjemahan Nick
3. Apa itu Sambungan Primer
4. Perbandingan sampingan - Nick Translation vs Primer Extension
5. Ringkasan

Apa itu terjemahan Nick?

Terjemahan Nick adalah teknik penting yang digunakan untuk menyediakan probe berlabel untuk pelbagai teknik biologi molekul seperti pembengkakan, in situ Hibridisasi, pendarfluor in situ hibridisasi dan lain -lain. Ia adalah in vitro kaedah pelabelan DNA. Probe DNA digunakan untuk mengenal pasti urutan DNA atau RNA tertentu. Dengan bantuan siasatan berlabel, serpihan tertentu dapat ditandakan atau digambarkan dari campuran kompleks asid nukleat. Oleh itu, probe berlabel disediakan menggunakan pelbagai teknik untuk digunakan untuk teknik yang berbeza. Terjemahan Nick adalah salah satu kaedah sedemikian yang menghasilkan probe berlabel dengan bantuan enzim DNase 1 dan DNA polimerase 1.

Proses terjemahan Nick bermula dengan aktiviti enzim DNase 1. DNase 1 memperkenalkan nikus dalam tulang belakang fosfat DNA terkandas berganda dengan mengikat ikatan phosphodiester antara nukleotida. Setelah Nick dicipta bebas 3 'OH kumpulan nukleotida akan dihasilkan dan enzim polimerase DNA 1 akan bertindak di atasnya. 5 'hingga 3' aktiviti exonuclease polimerase DNA 1 menghilangkan nukleotida dari nick ke arah 3 'arah helai DNA. Pada masa yang sama, aktiviti polimerase enzim polimerase 1 berfungsi dan menambah nukleotida untuk menggantikan nukleotida yang dikeluarkan. Sekiranya nukleotida dilabelkan, penggantian akan berlaku oleh nukleotida berlabel dan ia akan menandakan DNA untuk pengenalpastian. DNA berlabel yang baru disintesis ini boleh digunakan sebagai probe dalam pelbagai tindak balas hibridisasi dalam biologi molekul.

Rajah 01: Proses terjemahan Nick

Apa itu Sambungan Primer?

Pelanjutan Primer adalah teknik yang digunakan untuk mencari urutan RNA tertentu dari campuran RNA dan mencari 5 'akhir transkrip mRNA. Ia juga digunakan untuk mengkaji struktur RNA dan ungkapan. Kaedah pelanjutan primer dijalankan dengan primer berlabel atau dengan nukleotida berlabel. Jika primer berlabel digunakan, ia tidak termasuk keperluan pelabelan nukleotida yang digunakan untuk sintesis cDNA. Terdapat beberapa langkah dalam teknik ini. Ia bermula dengan pengekstrakan RNA dari sampel. Kemudian primer oligonukleotida berlabel ditambah kepada campuran bersama -sama dengan bahan -bahan yang diperlukan untuk mensintesis cDNA dari urutan RNA tertentu. Anneal primer dengan urutan pelengkap dari campuran. Menggunakan urutan primer annealed sebagai templat, enzim terbalik transkripase mensintesis DNA pelengkap (cDNA) dari urutan RNA. Primer Penyepuh dan transkripsi terbalik hanya berlaku apabila urutan RNA tertentu terdapat dalam sampel. Akhirnya, apabila elektroforesis gel menafikan, saiz urutan RNA dapat ditentukan. Ia juga mudah untuk mencari asas +1 urutan mRNA (tapak permulaan transkripsi) dengan kaedah lanjutan primer. Jumlah mRNA yang terdapat dalam sampel boleh diukur dengan kaedah ini jika primer berlebihan digunakan.

Rajah 02: Pelanjutan Primer

Apakah perbezaan antara terjemahan nick dan lanjutan primer?

Ringkasan -Nick Translation vs Primer Extension

Nick Translation adalah kaedah yang digunakan untuk mensintesis probe berlabel berdasarkan aktiviti DNase 1 dan E coli Enzim polimerase 1 DNA. Ia adalah in vitro Kaedah yang digunakan di makmal sebelum teknik hibridisasi yang berbeza. Semasa terjemahan Nick, 5'-3 'aktiviti exonuclease polimerase DNA 1 menghilangkan nukleotida di hadapan aktiviti nick dan polimerase polimerase DNA 1 menggantikan nukleotida yang dikeluarkan dengan nukleotida berlabel di belakang Nick. Pelanjutan Primer adalah kaedah yang digunakan untuk mengesan transkrip RNA tertentu dari campuran dan mengukur saiz dan jumlah RNA faedah. Ini adalah perbezaan antara terjemahan nick dan lanjutan primer.

Rujukan
1. Reid, Alex. "Terjemahan Nick."Springer. N.p., n.d. Web. 18 Apr. 2017
2. "Pelanjutan Primer."Diagnostik Kebangsaan. N.p., n.d. Web. 19 Apr. 2017
3. Kuo, m. T., dan w. Plunkett. "Nick-Translation of Metaphase Chromosomes: In vitro pelabelan kawasan nukleus-hypersensitive dalam kromosom."Prosiding Akademi Sains Negara Amerika Syarikat. U.S. Perpustakaan Perubatan Negara, Feb. 1985. Web. 19 Apr. 2017
4. Raymond et al. “Ujian PCR Pelanjutan Primer yang sederhana dan kuantitatif untuk pemantauan langsung mikroRNA dan RNA pendek yang interfering."RNA. Hak Cipta 2005 oleh RNA Society, Nov. 2005. Web. 19 Apr. 2017

Ihsan gambar:
1. "Primer Extension Assay" oleh JJNMMNJJ - Kerja Sendiri (CC BY -SA 3.0) melalui Commons Wikimedia