Perbezaan antara terjemahan nick dan pengisian akhir

The Perbezaan utama Antara terjemahan Nick dan pengisian akhir ialah Nick Translation adalah proses yang mencipta probe DNA berlabel untuk pelbagai tindak balas hibridisasi semasa pengisian akhir adalah teknik yang menghasilkan serpihan tumpul dengan menambahkan nukleotida menjadi overhangs satu-stranded.

Nick Translation and End Filling adalah dua teknik yang digunakan dalam Biologi Molekul. Terjemahan Nick digunakan untuk pelabelan untuk hibridisasi untuk mengesan urutan nukleotida tertentu. Pengisian akhir digunakan untuk membuat serpihan tumpul yang melekit hujung dengan overhangs satu-stranded. Kedua -dua teknik ini sangat penting, dan mereka dilakukan secara rutin dalam makmal penyelidikan molekul.

Kandungan

1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apa itu terjemahan Nick 
3. Apa itu Pengisian Akhir
4. Persamaan antara terjemahan nick dan pengisian akhir
5. Perbandingan sampingan - Nick Translation vs End Filling dalam Borang Tabular
6. Ringkasan

Apa itu terjemahan Nick?

Terjemahan Nick adalah teknik penting yang digunakan untuk menyediakan probe berlabel untuk pelbagai teknik biologi molekul seperti pembengkakan, in situ Hibridisasi, pendarfluor in situ Hibridisasi, dan lain -lain. Ia adalah in vitro kaedah pelabelan DNA. Probe DNA digunakan untuk mengenal pasti urutan DNA atau RNA tertentu. Dengan bantuan siasatan berlabel, serpihan tertentu dapat ditandakan atau digambarkan dari campuran kompleks asid nukleat. Oleh itu, Probe berlabel disediakan menggunakan pelbagai teknik. Terjemahan Nick adalah salah satu kaedah sedemikian yang menghasilkan probe berlabel dengan bantuan enzim DNase 1 dan DNA polimerase 1.

Rajah 01: Terjemahan Nick

Proses terjemahan Nick bermula dengan aktiviti enzim DNase 1. DNase 1 Memperkenalkan Nicks ke tulang belakang fosfat DNA dua terkandas dengan mengikat ikatan fosfodiester antara nukleotida. Sebaik sahaja Nick dicipta, Kumpulan 3 'OH Nukleotida percuma akan dihasilkan, dan enzim DNA Polimerase 1 akan bertindak di atasnya. 5 'hingga 3' aktiviti exonuclease polimerase DNA 1 menghilangkan nukleotida dari nick ke arah 3 'arah helai DNA.

Pada masa yang sama, aktiviti polimerase enzim polimerase 1 berfungsi dan menambah nukleotida untuk menggantikan nukleotida yang dikeluarkan. Sekiranya nukleotida dilabelkan, penggantian akan berlaku oleh nukleotida berlabel, dan ia akan menandakan DNA untuk mengenal pasti. Akhirnya, DNA berlabel yang baru disintesis ini boleh digunakan sebagai probe dalam pelbagai reaksi hibridisasi.

Apa itu Pengisian Akhir?

Pengisian akhir adalah teknik yang digunakan dalam biologi molekul untuk membuat serpihan tumpul. Pencernaan sekatan menghasilkan serpihan dengan overhang. Serpihan ini mungkin tidak serasi dengan ligate ke dalam vektor plasmid. Vektor sering tumpul untuk membolehkan hujung yang tidak bersesuaian disatukan. Oleh itu, serpihan dengan overhang boleh tumpul dengan menambahkan nukleotida ke helai pelengkap menggunakan overhang sebagai templat untuk pempolimeran. Proses ini dikenali sebagai pengisian akhir.

Polimerase DNA seperti serpihan klenow polimerase DNA I dan T4 polimerase DNA memangkinkan pengisian akhir. Mereka menambah nukleotida untuk mengisi (5 '→ 3') dan mengunyah kembali (3 '→ 5'). Sebaik sahaja hujung melekit dipenuhi, mereka menjadi tumpul, dan mereka sudah bersedia untuk menjadi vektor.

Selain itu, pengisian akhir boleh digunakan untuk melabelkan molekul DNA. Walau bagaimanapun, ia hanya boleh digunakan untuk melabelkan molekul DNA dengan hujung melekit. Sebagai perbandingan dengan terjemahan Nick, pengisian akhir adalah kaedah yang lebih lembut yang jarang menyebabkan rehat DNA.

Apakah persamaan antara terjemahan nick dan pengisian akhir?

• Kedua -dua terjemahan Nick dan pengisian akhir adalah teknik biologi molekul.
• Mereka boleh digunakan untuk melabelkan probe.
• Kedua -duanya adalah in vitro

Apakah perbezaan antara terjemahan nick dan pengisian akhir?

Nick Translation adalah teknik yang mencipta probe berlabel untuk hibridisasi. Sebaliknya, pengisian akhir adalah teknik yang menghasilkan serpihan tumpul untuk ligation menjadi vektor. Jadi, ini adalah perbezaan utama antara terjemahan Nick dan pengisian akhir. Tambahan pula, terjemahan Nick memerlukan penggunaan aktiviti exonuclease 5''to 3 semasa pengisian akhir tidak memerlukan aktiviti exonuclease 5''to 3 '.

Infographic di bawah ini menyusun perbezaan antara terjemahan Nick dan pengisian akhir dengan lebih terperinci.

Ringkasan -Nick Translation vs End Filling

Nick Translation adalah kaedah yang menggabungkan nukleotida radiolabel menjadi DNA. Ia mensintesis probe berlabel berdasarkan aktiviti DNase 1 dan E. coli Enzim polimerase 1 DNA. Pengisian akhir, sebaliknya, adalah teknik yang menghasilkan serpihan tumpul. Apabila serpihan mempunyai hujung melekit (overhangs satu-stranded), perlu menjadikannya berakhir tumpul untuk memasuki vektor. Pengisian akhir menambah nukleotida yang serasi dan mencipta serpihan akhir tumpul untuk menjadikannya serasi untuk ligation. Oleh itu, ini meringkaskan perbezaan antara terjemahan Nick dan pengisian akhir.

Rujukan:

"Blunting: Neb."New England Biolabs: Reagen untuk Industri Sains Hayat, boleh didapati di sini.
"Nick Translation - Gambaran Keseluruhan". Sciencedirect.Com, 2020, boleh didapati di sini.

Ihsan gambar:

1. "Ikan (pendarfluor di situ hibridisasi)" oleh mrmatze - kerja sendiri (CC by -sa 3.0) melalui Commons Wikimedia