Perbezaan antara pengklonan dan subcloning

Perbezaan utama - pengklonan vs subcloning
 

Pengklonan dan subcloning adalah prosedur biologi molekul yang menghasilkan sel atau organisma yang sama dengan genetik yang mengandungi DNA atau gen yang berminat. Pengklonan adalah teknik yang melibatkan penyisipan gen atau DNA yang berminat menjadi vektor, replikasi dalam bakteria tuan rumah, dan pengeluaran sel atau organisma yang tepat salinan solek genetik. Subcloning adalah teknik yang melibatkan penyisipan gen yang menarik, yang telah dimasukkan ke dalam vektor, ke dalam vektor sekunder, replikasi dalam bakteria tuan rumah, dan pengeluaran salinan sel atau organisma yang sama dengan genetik. Perbezaan utama antara pengklonan dan subcloning ialah, Dalam pengklonan, gen yang menarik, pernah disambungkan ke dalam vektor, meneruskan proses pengklonan sementara, dalam subcloning, gen yang telah diklonkan kepentingan dipisahkan dari vektor induk dan dimasukkan semula ke dalam vektor penerima dan meneruskan proses.

Kandungan
1. Gambaran Keseluruhan dan Perbezaan Utama
2. Apa itu pengklonan
3. Apa itu subcloning
4. Perbandingan sampingan - pengklonan vs subcloning
5. Ringkasan

Apa itu pengklonan?

Pengklonan adalah prosedur yang menghasilkan organisma atau sel yang sama secara genetik. Secara semula jadi, pengklonan berlaku dalam cara pembiakan aseksual. Apabila tidak ada rekombinasi atau perubahan genetik, sel -sel anak perempuan menerima solek genetik yang sama dari ibu bapa. Organisma prokariotik dan eukariotik mencipta klon dengan pembelahan binari, tunas, mitosis, dll.  Dalam biologi molekul, pengklonan gen atau serpihan tertentu DNA adalah kaedah yang popular untuk mengkaji struktur dan fungsi bahagian DNA tertentu.

Objektif utama pengklonan molekul adalah untuk membuat berjuta -juta salinan sel atau organisma yang sama dengan genetik yang mengandungi fragmen DNA kepentingan (terutamanya gen). Ia mewujudkan organisma dengan salinan genetik yang tepat. Terutamanya, gen tertentu diklonkan dalam kajian molekul untuk mendapatkan maklumat struktur dan fungsi dan untuk penjujukan DNA. Juga, untuk pengeluaran protein atau produk tertentu secara besar -besaran, pengklonan digunakan secara meluas.

Prosedur pengklonan

Langkah asas prosedur pengklonan adalah seperti berikut.

1. Pengenalan dan pengasingan gen yang menarik. (Penguatan gen yang menarik oleh PCR).
2. Pembatasan penghadaman gen yang menarik (sekatan endonuclease memotong gen).
3. Pembatasan pencernaan DNA vektor. (DNA vektor juga dipotong menggunakan endonuclease sekatan yang sama).
4. Penyisipan gen ke dalam vektor dan pembentukan molekul rekombinan.
5. Transformasi vektor rekombinan ke dalam bakteria tuan rumah.
6. Pengasingan dan pengenalan bakteria yang diubah (vektor plasmid harus mengandungi gen yang boleh dipilih, yang paling biasa merupakan gen rintangan antibiotik untuk menyaring bakteria yang berubah).
7. Ekspresi gen rekombinan di dalam tuan rumah.

Rajah_01: Prosedur pengklonan

Apa itu subcloning?

Subcloning adalah prosedur memindahkan gen yang menarik dari satu vektor ke vektor lain untuk melihat ungkapan gen untuk mendapatkan fungsi yang dikehendaki dari gen. Dalam kaedah ini, dua vektor terlibat; iaitu, vektor induk dan vektor destinasi. Sisipan klon dipindahkan semula ke dalam vektor kedua dalam subcloning. Objektif memindahkan gen dari vektor pertama ke vektor kedua adalah untuk mendapatkan sesuatu yang tidak dapat dilakukan oleh vektor pertama atau memisahkan gen sekali lagi dalam serpihan yang telah diklonkan DNA dan menyatakannya sendiri. Enzim sekatan digunakan dalam prosedur ini pada mulanya.

Prosedur subcloning

Langkah asas subcloning adalah seperti berikut.

1. Dengan bantuan endonucleases sekatan, pemisahan DNA kepentingan dalam plasmid penderma (vektor induk).
2. Penguatan DNA yang menarik menggunakan PCR.
3. Penyucian produk PCR (DNA minat) oleh elektroforesis gel.
4. Pembukaan plasmid penerima dengan endonukleases sekatan yang sama digunakan untuk memisahkan DNA kepentingan dalam plasmid induk.
5. Ligation DNA yang menarik (gen) ke plasmid penerima untuk membuat plasmid subcloned.
6. Transformasi vektor subcloned ke dalam bakteria tuan rumah yang kompeten.
7. Pemeriksaan sel yang berubah.
8. Penyucian DNA plasmid dan gunakan untuk penjujukan DNA atau ekspresi gen untuk mendapatkan produk yang dikehendaki.

Subcloning dijalankan pada masa -masa mengasingkan satu gen dari kumpulan gen yang diklonkan atau ketika gen yang menarik diperlukan untuk dipindahkan ke plasmid yang berguna untuk melihat fungsi tepat gen yang menarik.

Rajah_02: Prosedur subcloning

Apakah perbezaan antara pengklonan dan subcloning?

Ringkasan - Pengklonan vs subcloning

Pengklonan mewujudkan sel atau organisma yang sama dengan gen dengan gen yang dimasukkan atau DNA. Ia meneruskan pemisahan dan penyisipan DNA yang menarik ke dalam vektor dan ekspresi dalam bakteria tuan rumah. Subcloning berkongsi langkah serupa dengan pengklonan. Walau bagaimanapun, dalam subcloning, telah diklonkan serpihan DNA (gen yang menarik) dimasukkan ke dalam vektor dan diubah menjadi bakteria tuan rumah. Itu adalah perbezaan utama antara pengklonan dan subcloning.

Rujukan

1. Lodish, Harvey. "Pengklonan DNA dengan vektor plasmid."Biologi sel molekul. Edisi ke -4. U.S. Perpustakaan Perubatan Negara, 01 Jan. 1970. Web. 05 Mac. 2017
2. "Subcloning."Wikipedia. Yayasan Wikimedia, 14 Feb. 2017. Web. 06 Mac. 2017
3. "Subcloning."Subcloning | Buka Artikel Akses | Buka Jurnal Akses | Prosiding Persidangan | Editor | Pengarang | Pengulas | peristiwa saintifik. N.p., n.d. Web. 06 Mac. 2017
4. Wackerhage, Henning. "Cara Subclone."Cara Subclone. N.p., 01 Jan. 1970. Web. 06 Mac. 2017

Imej ihsan

1. Prosedur Pengklonan Molekul - oleh CNX OpenStax [CC oleh 4.0], melalui Wikimedia Commons
2. Prosedur subcloning - oleh pemuat naik asal adalah takometer di Wikipedia Inggeris (dipindahkan dari en.Wikipedia ke Commons.) [Cc oleh 2.5], melalui Wikimedia Commons